Tabla de reconstitución de péptidos: concentración por tamaño de vial y volumen de diluyente

La reconstitución convierte un péptido liofilizado de nuevo en una solución que se puede medir y con la que se puede trabajar. La aritmética es sencilla, pero también es donde empiezan muchos errores de investigación. Una coma decimal mal colocada, un peso de etiqueta que no refleja el contenido real de péptido o un volumen de diluyente elegido sin pensar en la exactitud del pipeteo pueden desplazar todas las concentraciones de un estudio.

Esta página está pensada como una referencia que puede tener abierta o imprimir. Ofrece una tabla maestra de concentraciones para los tamaños de vial y los volúmenes de diluyente más habituales, la única fórmula que hay detrás de cada valor y una tabla de dilución para preparar soluciones de trabajo. También cubre las correcciones que la mayoría de las tablas omiten: el contenido neto de péptido, la forma de sal y los factores prácticos que deben orientar cuánto diluyente elegir.

La tabla describe concentraciones de soluciones de investigación únicamente. No describe dosis, vías de administración ni ningún uso en personas o animales.

Uso exclusivo en investigación. Todos los productos mencionados en esta página están destinados únicamente a la investigación de laboratorio in vitro. No son para uso humano ni veterinario.

Puntos clave

• La concentración es igual a la cantidad de péptido dividida por el volumen de diluyente. Cada valor de la tabla sale de esa única fórmula.
• Añadir más diluyente reduce la concentración, pero no cambia la cantidad total de péptido del vial.
• El peso de la etiqueta es un objetivo y a menudo se refiere al polvo, no al péptido puro. El contenido neto de péptido del certificado de análisis del lote da una cantidad de partida más exacta [1,2].
• La forma de sal importa. Contraiones como el trifluoroacetato pueden constituir una parte significativa del peso del polvo [2,3].
• Elija un volumen de diluyente que dé una concentración fácil de pipetear con exactitud y adecuada para la solubilidad y la estabilidad del péptido.
• Para las soluciones de trabajo, use la relación de dilución C1 × V1 = C2 × V2.

Cómo funciona la concentración de reconstitución

Todos los números de esta página salen de una sola relación:

Concentración (mg/mL) = cantidad de péptido (mg) ÷ volumen de diluyente (mL)

Si un vial contiene 10 mg de péptido y añade 2 mL de diluyente, la solución es de 5 mg/mL. Si añade 5 mL, es de 2 mg/mL. El péptido total sigue siendo de 10 mg en ambos casos. Solo cambia la cantidad por mililitro.

Unidades que causan confusión

La mayoría de los errores provienen de las conversiones de unidades y no de la fórmula. Conviene tener presentes estas equivalencias.

• 1 mg = 1.000 µg (microgramos).
• 1 mL = 1.000 µL (microlitros).
• 1 mg/mL es lo mismo que 1 µg/µL y lo mismo que 1.000 µg/mL.
• 0,1 mL equivale a 100 µL.

Una comprobación útil: a 1 mg/mL, cada microlitro contiene un microgramo. Si su concentración es de 5 mg/mL, cada microlitro contiene 5 µg, y 100 µL contienen 500 µg.

Por qué la tabla usa mg/mL

La concentración en mg/mL es la unidad estándar en el trabajo analítico y con células, y se convierte limpiamente a molaridad una vez que se conoce el peso molecular del péptido. Para convertir, divida la concentración en mg/mL entre el peso molecular en g/mol, lo que da mol/L. Para un péptido de 1.000 Da a 1 mg/mL, eso es 1 mM.

Tabla maestra de reconstitución de péptidos

La tabla siguiente muestra la concentración resultante para los tamaños de vial habituales con cuatro volúmenes de diluyente. Supone que el vial contiene la cantidad indicada de péptido. Consulte la sección siguiente para saber cómo corregir esa suposición.

Los valores de 3 mL están redondeados a dos decimales, de modo que son aproximados. Para otras combinaciones, divida la cantidad de péptido entre el volumen, o use nuestra calculadora de péptidos, que realiza el mismo cálculo para cualquier dato.

Cómo leer la tabla

Busque el tamaño de su vial en la columna izquierda y lea hacia la derecha hasta el volumen que piensa añadir. La celda muestra la concentración de la solución madre resultante. Para hallar la cantidad de péptido en cualquier volumen de esa solución madre, multiplique la concentración por el volumen. Por ejemplo, 50 µL de una solución de 5 mg/mL contienen 250 µg.

Concentraciones altas y solubilidad

Algunas celdas de la tabla describen soluciones muy concentradas, como 50 mg en 1 mL. No todos los péptidos se disuelven a esos niveles. Las secuencias hidrófobas, las cadenas más largas y los péptidos propensos a agregarse pueden necesitar más diluyente, otro disolvente o una manipulación suave para disolverse por completo. Una concentración que parece cómoda sobre el papel solo es útil si el péptido permanece en solución.

Corrección según lo que realmente hay en el vial

La tabla supone que el vial contiene exactamente la cantidad indicada de péptido. En la práctica, esa suposición a menudo falla, por dos razones distintas.

Contenido neto de péptido

Un polvo de péptido liofilizado no es péptido puro. También contiene contraiones unidos a los grupos cargados del péptido y algo de agua residual. El contenido neto de péptido es el porcentaje del polvo que es realmente péptido, medido con métodos como el análisis de aminoácidos o el análisis de nitrógeno [1,2]. El contenido neto de péptido es una medición distinta de la pureza por HPLC [1].

Si el peso de la etiqueta se refiere al polvo, la cantidad real de péptido es el peso de la etiqueta multiplicado por el contenido neto de péptido. Un vial de 10 mg con un 80 % de contenido neto de péptido contiene 8 mg de péptido. Reconstituido en 2 mL, eso da 4 mg/mL, no los 5 mg/mL que sugeriría la tabla.

Forma de sal

El tipo de contraión afecta a qué parte del polvo es péptido. El trifluoroacetato, el contraión que deja por defecto la síntesis estándar y la purificación por HPLC, es más pesado que el acetato. El contenido neto de péptido teórico puede estimarse dividiendo el peso molecular del péptido entre el peso del péptido más el número de contraiones multiplicado por el peso del contraión [2]. Para un péptido de 1.000 Da con dos contraiones de trifluoroacetato, eso da aproximadamente un 81 % [2].

En los péptidos cortos con varios residuos básicos, el efecto es mayor. Nuestra guía de formas de sal desarrolla ejemplos en los que una sal de trifluoroacetato es aproximadamente dos tercios péptido en peso. Usar el peso de la etiqueta sin corrección en ese caso sobrestima la concentración en torno a un 50 %.

Exactitud del llenado

Aparte de la química, la cantidad llenada en cada vial puede variar respecto a la etiqueta. Los análisis independientes han documentado llenados que van desde casi exactos hasta sustancialmente por encima o por debajo de la cantidad indicada. Nuestra guía de exactitud del llenado de viales explica por qué y cómo leer el contenido medido en un certificado de análisis.

Qué cifra usar

Cuando el certificado de análisis del lote informa del contenido de péptido medido por vial, use esa cifra. Si informa del contenido neto de péptido y la etiqueta se refiere al polvo, multiplique ambos. Si no hay ninguna de las dos, use el peso de la etiqueta y anote en sus registros que la cantidad de partida no está verificada. Nuestra guía sobre cómo leer un certificado de análisis explica dónde encontrar cada cifra. Puede consultar la documentación de lotes de 99 Purity Peptides en nuestra página de certificados.

Elegir un volumen de diluyente

La tabla muestra que son posibles muchos volúmenes para cualquier vial. La elección adecuada depende de lo que vaya a hacer con la solución después.

Exactitud del pipeteo

Los volúmenes pequeños son más difíciles de medir con exactitud que los grandes. Si su experimento necesita 10 µg por pocillo, una solución madre de 10 mg/mL exige pipetear 1 µL, algo difícil de hacer con precisión. Una solución madre de 1 mg/mL exige 10 µL, que es mucho más fiable. Como principio general, elija una concentración de solución madre que le permita trabajar dentro del intervalo cómodo de las pipetas de que dispone, o planifique una dilución intermedia.

Solubilidad

Como se ha señalado, las soluciones muy concentradas pueden no mantenerse disueltas. Empezar con un volumen moderado y observar si la solución queda transparente es más seguro que forzar una concentración alta. Una solución turbia o con partículas indica una disolución incompleta o agregación, y su concentración real es desconocida.

Estabilidad y almacenamiento

Los péptidos en solución son, en general, menos estables que el polvo liofilizado. La concentración puede influir en la estabilidad, y las soluciones muy diluidas pueden perder una proporción mayor de péptido por adsorción a las superficies del recipiente. Muchos laboratorios reconstituyen a una concentración moderada de solución madre, dividen la solución en alícuotas de un solo uso y las congelan, en lugar de descongelar y volver a congelar repetidamente un mismo vial. Nuestras pautas de almacenamiento de péptidos y nuestra guía sobre la estabilidad de los péptidos reconstituidos lo tratan en detalle.

Capacidad del vial

Un vial solo puede contener cierta cantidad de líquido. Añadir un volumen grande a un vial pequeño puede dejar muy poco espacio libre para mezclar. Compruebe la capacidad del vial antes de elegir una columna de volumen alto de la tabla.

Elegir un diluyente

El diluyente afecta a la solubilidad, a la esterilidad y a cuánto tiempo puede conservarse una solución.

Agua bacteriostática

El agua bacteriostática es agua estéril que contiene una pequeña cantidad de alcohol bencílico, que inhibe el crecimiento bacteriano en los viales de uso múltiple. Se usa habitualmente cuando se va a tomar muestras de una solución reconstituida de forma repetida. El alcohol bencílico puede no ser adecuado para todos los ensayos, en particular los de trabajo celular sensible, así que compruebe la compatibilidad con su sistema experimental. Nuestra guía de reconstitución con agua bacteriostática trata la técnica.

Agua estéril

El agua estéril sin conservante es adecuada cuando la solución se usará de inmediato o se dividirá en alícuotas de un solo uso. Evita introducir alcohol bencílico, pero no ofrece protección frente a la contaminación una vez abierto el vial.

Ácido acético diluido y otros disolventes

Algunos péptidos hidrófobos o básicos se disuelven mal en agua y se disuelven con más facilidad en ácido acético diluido. Nuestra guía de reconstitución con agua acética explica cuándo se aplica eso. Los péptidos muy hidrófobos pueden necesitar pequeñas cantidades de disolvente orgánico, que después debe tenerse en cuenta en el ensayo final.

Tampones

Reconstituir directamente en un tampón como la solución salina tamponada con fosfato resulta a veces cómodo, pero algunos péptidos son menos solubles a pH neutro o en soluciones con mucha sal. Un enfoque habitual es disolver primero el péptido en agua o en un disolvente suave y luego diluirlo en el tampón.

Preparación de soluciones de trabajo a partir de una solución madre

Un vial reconstituido suele ser una solución madre concentrada. La mayoría de los experimentos necesitan concentraciones de trabajo más bajas, que se preparan por dilución.

La fórmula de dilución

Las diluciones siguen una sola relación:

C1 × V1 = C2 × V2

C1 es la concentración de la solución madre, V1 es el volumen de solución madre que toma, C2 es la concentración objetivo y V2 es el volumen final. Despejando, el volumen de solución madre necesario es V1 = (C2 × V2) ÷ C1. Mantenga unidades coherentes: si C1 está en mg/mL, exprese también C2 en mg/mL.

Tabla de dilución para una solución de trabajo de 10 mL

La tabla siguiente muestra cuánta solución madre añadir, y completar después hasta 10 mL en total con diluyente o medio, para alcanzar concentraciones de trabajo habituales.

Varias celdas exigen volúmenes muy pequeños, como 1 o 2 µL. Son difíciles de pipetear con exactitud. Una dilución seriada, por ejemplo diluir primero la solución madre diez veces y usar después la solución intermedia, da mayor exactitud.

Diluciones seriadas

Para construir una serie de concentraciones, prepare primero la concentración de trabajo más alta y diluya después paso a paso. Una serie con factor de dilución diez toma 1 parte de cada solución en 9 partes de diluyente. Cada paso arrastra cualquier error del paso anterior, por lo que el pipeteo cuidadoso del primer paso es el que más importa.

Ejemplos desarrollados

Estos ejemplos muestran cómo se combinan en la práctica la tabla y las correcciones.

Ejemplo uno: directamente de la tabla

Un vial de 5 mg se reconstituye con 2 mL de diluyente. La tabla da 2,5 mg/mL. Para hallar la cantidad en 40 µL, multiplique 2,5 µg/µL por 40 µL, lo que da 100 µg.

Ejemplo dos: corrección por el contenido neto de péptido

Un vial etiquetado como de 10 mg tiene un certificado de análisis que informa de un 85 % de contenido neto de péptido, y la etiqueta se refiere al polvo. El péptido real es 10 × 0,85 = 8,5 mg. Reconstituido en 2 mL, la concentración es de 4,25 mg/mL, no de 5 mg/mL. Toda solución de trabajo preparada a partir de él debe usar 4,25 mg/mL como C1.

Ejemplo tres: elegir un volumen práctico

Un estudio necesita una solución de trabajo de 1 µg/mL en 10 mL. Con un vial de 10 mg en 1 mL (10 mg/mL), la tabla de dilución pide 1 µL de solución madre, algo difícil de pipetear con exactitud. Reconstituir el mismo vial en 5 mL da 2 mg/mL, lo que exige 5 µL. Una dilución intermedia con factor diez, hasta 0,2 mg/mL, lo elevaría a 50 µL, que es fácil de medir con exactitud.

Ejemplo cuatro: conversión a molaridad

Una solución de 2 mg/mL de un péptido con un peso molecular de 1.419,5 g/mol tiene una concentración molar de 2 ÷ 1.419,5 = 0,00141 mol/L, es decir, unos 1,41 mM. Las concentraciones molares son más significativas que las concentraciones másicas cuando se comparan péptidos de distinto tamaño.

Tablas específicas por compuesto

La tabla maestra sirve para cualquier péptido, pero algunos compuestos vienen en tamaños de vial o mezclas poco habituales, y las páginas específicas por compuesto añaden el peso molecular y notas de manipulación. Publicamos referencias dedicadas para varios péptidos de investigación:

• Tabla de reconstitución de BPC-157
• Tabla de reconstitución de TB-500
• Tabla de reconstitución de ipamorelina
• Referencia de reconstitución y concentración de KLOW

Para convertir volúmenes en graduaciones de jeringa, consulte nuestra tabla de conversión de agua bacteriostática a unidades. Como contexto sobre cómo elegir un volumen de diluyente, consulte cuánta agua bacteriostática usar al reconstituir péptidos.

Técnica de reconstitución

Una buena técnica protege tanto el péptido como la exactitud de la solución.

Antes de abrir

Deje que un vial refrigerado o congelado alcance la temperatura ambiente antes de abrirlo. Abrir un vial frío permite que la humedad se condense sobre el polvo. Compruebe el número de lote con el certificado de análisis y golpee suavemente el vial para que el polvo se asiente en el fondo.

Adición del diluyente

Mida el diluyente con exactitud con una pipeta o una jeringa calibrada. Añádalo despacio por la pared interior del vial y no directamente sobre el polvo, lo que reduce la formación de espuma. Use técnica estéril en todo momento, incluido limpiar el tapón antes de perforarlo.

Disolución

Gire o haga rodar el vial con suavidad hasta que el polvo se disuelva. Agitar con fuerza puede provocar espuma y, en algunos péptidos, agregación. Deje unos minutos para la disolución completa. La solución debe quedar transparente y sin partículas visibles.

Etiquetado y registro

Etiquete el vial con el péptido, el número de lote, la concentración, el diluyente, la fecha y sus iniciales. Registre la cantidad de partida que utilizó, ya sea el peso de la etiqueta, el contenido medido o el peso de la etiqueta corregido por el contenido neto de péptido. Ese registro es lo que permite que otra persona, o usted mismo meses después, reproduzca el trabajo.

Errores habituales de reconstitución

La mayoría de los problemas de reconstitución caen en una lista corta.

• Usar el peso de la etiqueta sin comprobar el contenido neto de péptido ni la forma de sal, lo que sobrestima la concentración.
• Confundir mg con µg o mL con µL, lo que produce errores de mil veces.
• Elegir una concentración de solución madre que exige pipetear volúmenes demasiado pequeños para medirlos con exactitud.
• Forzar una concentración alta que el péptido no puede mantener, dejando material sin disolver.
• Agitar con fuerza, provocando espuma y posible agregación.
• Congelar y descongelar repetidamente una misma solución madre en lugar de preparar alícuotas.
• No etiquetar la concentración y la fecha, lo que lleva a confundir unas soluciones madre con otras.
• Cambiar de lote a mitad de un estudio sin comparar sus certificados de análisis.

Cómo imprimir y usar esta tabla

Esta página está diseñada para imprimirse bien. La tabla maestra y la tabla de dilución caben en una sola página impresa en orientación vertical. También hay disponible una versión en PDF descargable en nuestra tabla de reconstitución imprimible. Tenga una copia cerca de su mesa de trabajo, pero confirme siempre la cantidad de partida con el certificado de análisis del lote antes de fiarse de cualquier valor.

Conclusión práctica

Una tabla de reconstitución solo es tan exacta como la cantidad de partida que se le aporta. La aritmética en sí es una única división, y la tabla anterior da los resultados de las combinaciones más habituales. Lo que convierte esa aritmética en investigación fiable es el paso que la mayoría de las tablas omiten: confirmar cuánto péptido hay realmente en el vial, tener en cuenta la forma de sal y el contenido neto de péptido, y elegir un volumen que se adapte a sus pipetas, a la solubilidad del péptido y a su plan de almacenamiento.

Use la tabla maestra como referencia rápida, la tabla de dilución para las soluciones de trabajo y el certificado de análisis del lote para la cifra de partida. Registre siempre qué cifra utilizó. Como lectura relacionada, consulte por qué importa la pureza de los péptidos y nuestro glosario de péptidos de investigación.

Referencias

1. Bachem. Quality control of amino acids and peptides: a guide. 2025. https://www.bachem.com/knowledge-center/quality-control-of-amino-acids-peptides-a-guide/
2. AmbioPharm. How is theoretical net peptide content calculated? Peptide FAQs. https://www.ambiopharm.com/faq/how-is-theoretical-net-peptide-content-calculated/
3. Sikora K, Jaśkiewicz M, Neubauer D, Migoń D, Kamysz W. The Role of Counter-Ions in Peptides: An Overview. Pharmaceuticals (Basel). 2020;13(12):442. PMID: 33287352. DOI: 10.3390/ph13120442.